14.FUT1基因c.35C>T和c.658C>T纯合突变产生OhA1例
一、简要病史
受检者为无偿献血者，男性，35岁，献血后复检ABO血型时发现正反定型不一致。既往体健，无输血史。
二、实验室检查
（一）血型血清学常规检查
1.血型鉴定
ABO正反定型不一致，RhD阳性，结果见表1-23。
2.抗体筛查
3系均为阳性（+）。
表1-23 血型鉴定结果
（二）血型血清学特殊检查
1.DAT
阴性。
2.唾液血型物质检测
发现受检者唾液中存在A和H物质。
3.抗体鉴定
10系谱细胞均为阳性（+）。
血清学结果：初步怀疑为A型类孟买型，血清中产生抗-HI抗体，抗体室温效价为1，4℃条件下的效价是2。
（三）血型分子生物学检测
1.ABO血型基因检测
根据ABO血型基因检测试剂盒提供的参考等位基因和电泳结果（图1-24）判定受检者ABO基因型为A1/O1。
图1-24 患者ABO基因PCR-SSP电泳图
注：上方条带为内参质控带，下方条带为阳性分型带；1～8：分别为O1阳性、非O1阳性、O2阴性、非O2阳性、B阴性、非B阳性、A2阴性、非A2阳性。
2.ABO基因直接测序
患者基因型为ABO*A1.01/O.01.01（即c.261delG/），与PCR-SSP结果一致。
3.FUT1基因测序
直接基因测序发现这名献血者的两个FUT1等位基因均发生c.35C>T（图1-25A）变异和c.658C>T（图1-25B）错义突变，而其余序列与FUT1基因参考序列（NM_000148）一致，其基因型为h35T+658T/h35T+658T。后又对该献血者母亲进行了FUT1基因测序，发现存在35 C/T杂合和658 C/T杂合，符合遗传学规律。
图1-25 患者FUT1基因第35位、658位核苷酸测序图
注：A：患者第35位核苷酸测序图（c.35C>T）；B：先证者第658位核苷酸测序图（c.658C>T）。
三、诊疗经过
该献血者献血前初检只做正定型，定为O型，复检时发现正反定型不一致，遂行分子生物学检测，最终定型为OhA-分泌型。
四、相关知识链接
目前国内外已报道的类孟买基因相关突变已超过40种，国内已报道的类孟买型个例已超过50例［1-5］，其中c.35C>T属于常见突变，在中国人群中的发生频率可达26%［6］，而c.658C>T突变也一种常见突变，但两种突变同时以纯合方式发生于一个人的两个等位基因却极其罕见。以往c.35C>T一直被认为是无义突变，与类孟买表型无关，但最近有研究表明，35T体外重组蛋白活性仅为FUT1野生型体外重组蛋白的79.45%［7］。c.658C>T突变可导致220位精氨酸变为半胱氨酸（p.Arg220Cys），这两个氨基酸的物理化学性质差异较大，极有可能导致α-1，2-岩藻糖基转移酶的生物活性降低甚至完全消失。而事实也证明，与FUT1野生型体外重组蛋白活性相比，658T体外重组蛋白活性为零［8］。
五、案例点评
本案例红细胞与抗-H反应呈阴性，与抗-A、抗-B、抗-AB反应也呈阴性，唾液中存在A和H物质，且ABO血型基因检测试剂盒及基因测序结果判定其ABO基因为ABO*A1.01/O.01.01，该结果与类孟买OhA-分泌型血型特点相符。针对FUT1基因进行测序的结果发现，患者存在c.35C>T和c.658C>T两处突变，FUT1基因型为h35T+658T/h35T+658T，两种突变同时以纯合方式发生于一个人的两个等位基因却极其罕见，c.35C>T只是削弱了FUT1蛋白的活性，而c.658C>T则使FUT1蛋白完全失活，两个等位基因均在35位和658位发生突变是导致先证者表现为类孟买表型的直接原因。
本研究中我们还检测了患者母亲的FUT1基因，发现存在35C/T杂合和658 C/T杂合，符合遗传学规律。由于客观原因尚未能对其他家系成员的FUT1基因进行突变分析，未能进一步明确该突变的来源及分子遗传机制。
参考文献
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8. CAI X H, JIN S, LIU X, et al. Molecular genetic analysis for the para-Bombay blood group revealing two novel alleles in the FUT1 gene［J］. Blood Transfusion, 2011, 9(4): 466-468.