八、肠道病毒71型疫苗

肠道病毒71型（EV71）于1969年在加利福尼亚州首次从患有脑炎和无菌性脑膜炎的幼儿中分离出来，此后被发现在全球范围内引起流行，包括手足口病的大规模暴发。 手足口病有时与无菌性脑膜炎和幼儿严重的中枢神经系统并发症有关。 EV-71 也是急性弛缓性麻痹（AFP）患者中的常见病原体，EV-71 的流行也会导致AFP 病例的增多。 此外EV-71 感染还会引起间质性肺炎和心肌炎。

EV71 属于小RNA 病毒科，肠道病毒属，为无包膜病毒。 EV71 颗粒为二十面体的对称结构，直径为24～30nm，由60 个亚单位组成。 病毒基因组为单股正链RNA，7400 核苷酸左右，包含有5’-UTR 区和3’-PolyA 尾。 EV71 的衣壳蛋白主要由VP1、VP2、VP3 和VP4 组成，其中，VP1、VP2 和VP3 位于病毒衣壳外部，VP4 位于病毒衣壳内部。 VP1 是EV71 主要的抗原表位。 EV71 只有一个血清型，依据VP1 区序列可分为A、B 和C3 个基因型以及11个基因亚型。 我国台湾和香港地区以及其他国家或地区近年来流行的主要基因型包括B4、B5、C2、C4 和C5 等亚型，我国大陆流行的EV71 主要为C4 亚型。 5 岁以下儿童和婴幼儿为EV71 易感人群。

多个国家或地区的企业和研究机构开展了EV71 疫苗的研发，疫苗种类包括全病毒灭活疫苗、基因工程重组蛋白疫苗、减毒活疫苗和多肽疫苗等。 其中，我国3 家企业研发的EV71全病毒灭活疫苗对EV71 感染所致HFMD（手足口病）的保护效果分别为97.4%、94.7%和90.0%。 2015年12月，国家食品药品监督管理总局批准EV71 全病毒灭活疫苗上市，为我国及世界范围控制EV71 感染相关的疾病，特别是严重HFMD 的暴发和流行提供了手段。 近年来HFMD 流行病原谱发生改变，柯萨奇病毒A 组6型、A 组10型感染引起HFMD 的流行呈增长趋势，提出了研发、防控HMFD 多价疫苗的需求。 基因工程重组蛋白疫苗中的病毒样颗粒（VLP）疫苗具有易工业化规模生产的优势，且在动物试验上显示良好的保护效果，显示了研发EV71 VLP 疫苗的可行性。

目前上市的EV71 疫苗为EV71 病毒株接种非洲绿猴肾细胞或人二倍体细胞，经培养、收获病毒液、灭活病毒、浓缩、纯化和氢氧化铝吸附制成，为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散。 每瓶/支0.5ml，每1 次人用剂量为0.5ml，含肠道病毒71型灭活疫苗中和抗体效价不低于3.0EU（EU 代表中和抗体效价单位）。 疫苗成品质控项目包括EV71 疫苗鉴别实验、外观、装量、无菌检查、细菌内毒素检查和异常毒性等指标；理化项目包括pH、氢氧化铝含量、游离甲醛含量以及渗透压摩尔浓度等指标。 细胞培养液中添加抗生素时，需检测成品中抗生素残留量。 疫苗的效力测定包括体内效力（ED50）以及体外相对效力，并测定中和抗体应答。