6.3 实验技术
6.3.1 样品的制备
测定时一般采用液体样品，固体样品需用合适的溶剂配成溶液，使其不含有未溶解的固体微粒、灰尘或顺磁性的杂质，且具有良好的流动性，常用惰性溶剂稀释，以避免导致谱线加宽。理想的溶剂要求不含被测的原子核，沸点低，对试样的溶解性能好，不与样品发生化学反应或缔合，且吸收峰不与样品峰重叠。CCl4无1H信号峰，价廉，是测定1H谱常用的溶剂，而在精细测定时，可采用氘代溶剂，如D2O、CDCl3等。不同溶剂由于极性、溶剂化作用、氢键的形成等而具有不同的溶剂效应。
6.3.2 标准参考样品
测定试样的化学位移δ必须用标准物质为参考，按加入的方式可分为外标（准）法和内标（准）法。外标法是将标准参考物装于毛细管中，再插入含被测试样的样品管内，同轴测定。内标法是将标准参考物直接加入样品中测量，以抵消磁化率的差别，内标法优于外标法。内标物应具有较高的化学惰性、易挥发、便于回收且有易于辨认的谱峰。对1H及13C谱，四甲基硅烷（TMS）是一个较理想的内标物，它有12个等价质子，只有一个尖锐的单峰。它的峰出现在高场，人为地规定其δ为零。一般化合物的谱峰常出现在它的左边，δ为正值，若在其右边出峰，δ为负值。TMS化学惰性，沸点较低（26.5℃），易回收。在高温操作时，则需改用六甲基二硅醚（HMDS）为内标物。在D2O做溶剂的样品测量时，由于TMS不溶于水，应选用4，4-二甲基-4-硅代戊磺酸钠［（CH3）3SiO3Na，DSS］为内标。测定不同核所用的内标物不同，如对于31P核，用85%磷酸。内标物的用量应视试样量而定，测1H用四甲基硅烷（TMS）为内标时，一般制备0.4mL约10%样品溶液，加1%～2%TMS。
6.3.3 谱图解析
从核磁共振图谱上可以获得三种主要的信息：①从化学位移判断核所处的化学环境；②从峰的分裂个数及偶合常数鉴别谱图中相邻的核，以说明分子中基团间的关系；③积分线的高度代表了各组峰面积，而峰面积与分子中相应的各种核的数目成正比，通过比较积分线高度可以确定各组核的相对数目。综合应用这些信息就可以对所测定样品进行结构分析和鉴定，确定其相对分子质量，也可用于定量分析。但有时仅依据其本身的信息来对试样结构进行准确的判断是不够的，还要与其他方法相结合。
①化合物的结构信息
a.共振吸收峰的数目 提供分子中质子的不同类型情况。
b.共振吸收峰的位置 提供每种质子的电子环境，即邻近有无吸电子或推电子的基团。
c.共振吸收峰的强度 提供各类氢核（各基团）的数量比。
d.共振吸收峰的裂分情况 判断相邻碳原子上氢核数、质子类型情况，以及所处化学环境。
②解析顺序
a.了解清楚样品的基本情况，以便对样品有大概的认识；检查基线是否平稳，检查内标物TMS峰位是否准确、正常；积分曲线在无峰处应平直，区别溶剂峰、杂质峰。
b.根据化合物分子式，计算不饱和度，确定不饱和单元，然后根据积分曲线高度算出各个信号的对应得H数。可能条件下，宜在δ×10-6的区域先找出如CH3O—、
、CH3—Ar、CH3CO—、
、CH3—C—等孤立的CH3基（3H，S）信号，并按其积分曲线高度去复核其他信号相应的氢数，算出氢分布。
c.根据化学位移、耦合常数等特征，识别一些强单峰及特征峰。对于含活泼氢的未知物，可对比D2O交换前后光谱的改变，确定活泼氢的峰位及类型。
d.若在化学位移δ（6.5～8.5）×10-6的范围内出现强的单峰或多重峰，往往要考虑其是苯环上氢的信号。根据这一区域氢的数目，可以判断苯环的取代数。
e.参考化学位移、小峰数目及耦合常数，计算δ、J，确定图谱中耦合部分。由共振峰的化学位移及峰裂分，确定归属。解析比较简单的多重峰，根据每组峰的化学位移及相对应的质子数，推测本身及相邻的基团结构。
f.对难解析的高级耦合系统，如有必要，可换用不同的溶剂再测定一次，有时由于化学位移的变化，共振谱会简化。如果条件允许可加入位移试剂或采用去耦实验、NOE（核的Overhauser）测定等特殊技术，或改用强磁场NMR仪测定，以利简化图谱，方便解析。
g.通过以上几个程序，一般可初步推断出可能的一种或几种结构式。然后从可能的结构式按照一般规律预测可能产生的NMR谱，与实际图谱对照，看其是否符合，进而推断出某种最可能的结构式。
应用示例：某化合物的化学式为C9H13N，其1H-NMR谱如图6-7所示，试推断其结构。
图6-7 化合物C9H13N的1H-NMR谱图
解：①计算不饱和度
②根据谱图上的积分曲线高度计算每组峰代表的氢核数。
因不饱和度为4，且在7.2处有共振峰，表明有苯环存在，且苯环有5个质子，表明为单取代苯环。
③代表2个1H的δ3.4/ppm吸收峰为亚甲基，而6个氢的δ3.4/ppm的吸收峰为两个亚甲基，且均为单峰，表明两者与之直接相连的原子上无氢的存在，两者没有直接相连。
④根据分子式C9H13N可知结构中有一个N存在。因甲基与亚甲基没有直接相连，故可初步判定分子中有—CH2N（CH3）2存在。
⑤结合以上推断，此化合物可能的结构为
