针对NB细胞具有自行消退、自愈的特性，从分子水平探索NB细胞分化凋亡的机制，设计人为的干预改善NB细胞传导通路，促使NB细胞分化成熟，进而揭示NB细胞逆转的机制，是课题组多年来执着追求的目标。

在临床治疗中，对众多患儿不是采用强烈化疗方案，而是根据其有无骨髓等脏器转移及转移程度，予以个体化治疗，用小剂量药物进行诱导分化治疗+口服中药。统计1992～2016年收治的199例NB患儿中有10例NB患儿的肿瘤消失（胸纵隔4例，腹膜后、肾上腺5例，膀胱1例），另有3例Ⅳ期NB（腹膜后肿瘤）第一次手术部分切除时病理诊断为神经母细胞瘤，术后行小剂量诱导分化治疗，1.5～2.5年后再次手术切除肿瘤，病理证实为神经节细胞瘤或为神经纤维瘤，就此停止治疗。其中1例，后纵隔巨大NB肿瘤，骨髓转移，瘤细胞达80.2%， N-myc基因检测10倍扩增，无法手术，应用小剂量化疗药行诱导化疗后，CT追踪观察，2.5年后，纵隔肿瘤逐渐缩小至消失， N-myc基因从扩增到减弱，骨髓象完全缓解。以上3例均痊愈，至今有2例已大学毕业，成家立业。

NB骨髓转移瘤细胞体外原代培养的NB瘤细胞与体内细胞生物学性状相似，遗传性状稳定，更接近体内状态，取材方便，标本来源广泛，个体特异性好，可为NB生物学、细胞遗传学、体外诱导分化等研究提供更多的理论依据。

取初诊NB患儿骨髓转移瘤细胞27例。

1.体外原代培养。

2.KCNR、SY5Y细胞对照（美国NIH希尔教授赠送）。

3.细胞形态学观察 用倒置荧光显微镜每天定时观察，原代培养的NB细胞及KCNR、SY5Y细胞生长情况及形态学特点。

4.单克隆抗体F ₃系列检测（侨联酶标APAAP法）鉴定原代培养NB细胞的阳性百分数>30%，为阳性（军事医学科学院基础所提供）。

27例原代培养，9例成功。培养成功条件：瘤细胞百分数>80%（详见表1-1、图1-1）。

1.培养初期细胞呈葡萄状悬浮生长。

2.培养1周后细胞大多贴壁生长呈菊花团状排列，可见到长短不一的轴突，2周后细胞完全贴壁，由菊花团状逐渐变成多角或菱形的分化细胞。